NEB Exprimarea proteinelor și tehnologii de purificare
Instrumente flexibile pentru exprimarea și purificarea proteinelor
Exprimarea și purificarea proteinelor pot fi procese foarte dificile, deoarece nu există o abordare unică potrivită pentru toate proteinele. Aceste procese pot fi afectate de solubilitatea fiecărei proteine, toxicitatea lor și necesitatea modificărilor post-translaționale. În plus, procedurile pentru care proteinele vor fi utilizate pot dicta modul în care acestea trebuie să fie exprimate sau purificate. Prin urmare, este important să existe un set de instrumente flexibile care pot fi aplicate fiecărui proiect în parte:
- IMPACT™ Kit
- pMAL™ Protein Fusion and Purification System
- PURExpress® In Vitro Protein Synthesis Kit.
- IMPACT™ (Intein Mediated Purification with an Affinity Chitin-binding Tag) este un sistem nou de purificare a proteinelor care utilizează activitatea de auto-clivaj inductibil al elementelor de “splicing”, pentru a separa proteina țintă. Purificare într-o singură etapă cromatografică fără a utiliza o protează.
- Sistemul pMAL™ Protein Fusion and Purification System necesită introducerea unei gene clonate într-un vector pMAL, având ca rezultat exprimarea unei proteine de fuziune MBP. Eluție ușoară cu maltoză, nu sunt necesari detergenți, exprimare fiabilă a proteinei până la 100 mg/l.
- PURExpress® este un sistem de sinteză proteică reconstituit bazat pe PUREsystem™ (Shimizu et al., 2001) în care toate componentele necesare pentru transcripția și translația in vitro sunt purificate din E. coli. Proteina de interes poate fi sintetizată și vizualizată în doar câteva ore. Aplicațiile includ: screening, biologie sintetică, sinteza de proteine toxice sau dificil de exprimat, activitatea și interacțiunea proteină-proteină.